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心肌梗死及由此而导致的心功能不全是严重威胁人类健康的最常见疾病之一。如何使心肌细胞再生，从而改善心功能是国内外医学探讨的热门课题。近年，大量研究证实具多向分化潜能的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）可从体外诱导分化成心肌细胞，并可通过局部注射或全身输送的方法在心肌梗死区分化成心肌细胞及新生血管，从而有效地改善梗死区的心肌重构，提高心功能［1～9］。本研究采用超声心动图对三组SD鼠进行检测，旨在探讨MSC移植对急性心肌梗死的疗效。
1 材料与方法
1.1 动物来源及实验动物分组：健康SD大鼠16只，体重200～250 g，由军事医学科学院实验动物中心提供。分组：盐水对照组（组1，6只）、假手术组（组2，5只）、干细胞治疗组（组3，5只）。
1.2 干细胞的制备：乙醚麻醉雄性SD大鼠（体重100 g左右）致死，无菌状态下分离后腿骨，用注射器及细胞培养基将骨髓冲洗到离心试管中，用梯度离心试剂Ficoll Paque Plus离心得到单核细胞，使用aMEM培养基+20％FBS重悬细胞沉淀，在37℃、50％CO2细胞培养箱中培养MSC至第四代，此时MSC呈均一的梭形。细胞用红色荧光染料DiI标记后进行同种异体移植实验。
1.3 大鼠心梗模型的制备以及细胞移植：大鼠手术前均以戊巴比妥钠（按40 mg/kg体重）麻醉，肌注青霉素20万u，然后在小动物呼吸机（频率60次/min）辅助下开胸。组1：结扎冠状动脉左前降支（LAD）1h后再灌注，然后关胸。结扎24 h后经尾静脉注射生理盐水1ml；组2：用细线穿过LAD，不结扎，1h后直接关胸；组3：结扎LAD 1h后再灌注，然后关胸。结扎24h后尾静脉注射MSC 2.5×106个（溶于生理盐水1ml）。
1.4 超声心动图检测：各组动物均于术后4周进行超声心动图检测。所用仪器为百胜（Esaote,Italy）DU8彩色多普勒超声仪以及附带的5.5～12.5 MHz变频探头，使用频率12.5MHz。检测项目：重点检测并记录三组大鼠的左心室舒张及收缩末期内径（LVDd、LVDs）、舒张末期室间隔及左室前壁厚度（IVSTed、AWTed）、收缩期室间隔及左室前壁活动幅度（AWA、IVSA），以上均在左心室短轴测量。此外，还观察并记录了左室舒张及收缩末期长径、宽径及面积（心尖四腔心测量）、舒张及收缩末期左室后壁厚度及幅度（左心室短轴测量）、有无室壁回声增强及室壁膨出、心率等。每组原始数据取3个连续的心动周期的平均值，由经验丰富的超声医师专人操作，采取双盲法。
根据Teichholzs公式：
LVEDV=（7×LVDd3）/(2.4+LVDd)
LVESV=（7×LVDs3）/(2.4+LVDs)
求出左心室舒张/收缩末期容积LVEDV、LVESV。根据
EF=（LVEDV－LVESV）/LVEDV
FS=（LVDd－LVDs）/LVDd 求出射血分数EF和左室短轴缩短率FS。
1.5 免疫荧光染色： `超声检测后立即处死大鼠，取心肌石蜡切片做免疫染色。切片与心肌细胞标志分子αactinin(Santa Cruz)或血管内皮细胞标志分子vWF(Dako,Denmark)抗体4℃孵育过夜，然后再与FITC二抗（Zymed,USA)室温孵育30 min，最后在荧光显微镜（Olympus,Japan）下观察。
1.6 统计学方法 应用SPSS 11统计软件，所有计量数据以均数±标准差（x±s）表示，组间均数比较采用单因素方差分析（one way ANOVA）的最小显著差数（LSD）法。P＜0.05时差异有显著性。
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