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胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，级别不同预后相差甚远。早期明确病变的性质，对治疗和预后都有很重要的意义。磁共振波谱（magnetic resonance spectroscopy, MRS）MRS可以提供病变的病理生理学信息，是其有可能定性诊断疾病的理论基础。已为免疫组织化学所证实的Ki-67、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）三种比较经典的判断胶质瘤增殖分级、侵袭能力及预后的病理学检测指标，将不同级别胶质瘤1H-MRS上代谢物水平与胶质瘤标本中的上述三种抗原的表达水平进行比较研究，分析其间是否存在相关性，以期对1H-MRS能否或者在多大程度上可以判断肿瘤分级，预计侵袭能力，评估预后进行初步探讨。
资料和方法
1 1H-MRS检查方法
1.1 病例选择 选取手术病理确诊的胶质瘤病例41例，男25例，女16例，年龄14-73岁，平均44.6岁，均有头痛、呕吐以及不同程度的感觉或运动障碍。所有病例均在行检查前未接受过放疗、化疗等任何形式的治疗，并在检查后同一周内进行手术切除。其中按WHO脑瘤分类标准(2000)分为: 中、低度恶性胶质瘤16例，包括胶质瘤Ⅰ级（毛细胞形星形细胞瘤）2例，胶质瘤Ⅱ级（星形细胞瘤Ⅱ级）14例；高度恶性胶质瘤25 例，包括胶质瘤Ⅲ级5例（间变性星形细胞瘤4例、间变性少突胶质细胞瘤1例），胶质瘤Ⅳ级（多形性胶质母细胞瘤）21例。
1.2 仪器及扫描参数：采用GE Signa EXCITEⅡ3.0T磁共振成像系统，为MRI/MRS一体化设备。1H-MRS扫描使用标准正交头线圈做为发射和接收线圈，采用点分辨波谱分析法(point-resolved spectroscopy，PRESS)，PROBE-P序列进行二维采集，TE 144ms, TR 1000ms, NEX 1，FOV 16，采集矩阵16×16，体素厚度10mm。以纯轴位采集常规T2像，用以定位。在避免颅骨、脂肪及气腔等影响的前提下，感兴趣区（ROI）尽量包括病变、病变周围水肿区及健侧相应区域。体素内匀场，水抑制均由自动扫描程序完成，扫描时间260s。
1.3 数据分析：所行二维1H-MRS检查均获得满意的图像质量，可以采用分析软件进行分析。所得原始数据在GE ADW4.2工作站上以Functool 3.1软件进行后处理。依据VOI定位像以及常规MRI扫描横断面T2WI及FLAIR、增强T1WI像，在代谢和解剖之叠加图上，分别在胶质瘤病灶实质部分、病变周围水肿区以及健侧相应区域各选取3个体素，测定和分析其代谢物的变化。观测的主要代谢物为:NAA (2.02ppm)、Cho(3.2ppm)、Cr(3.0ppm)、Lip(0.9、1.3ppm)、Lac(1.33ppm)峰、并计算Cho/NAA、NAA/Cr以及Cho/Cr。
2. 免疫组织化学实验方法
2.1 组织来源: 选用19例脑胶质瘤的石蜡包埋组织, 中、低度恶性胶质瘤8例(包括星形细胞瘤8例),高度恶性胶质瘤11例(包括间变性星形细胞瘤4例，多形性胶质母细胞瘤7例)。常规切片后备用。
2.2 免疫组化及其分析
一抗包括Ki-67、PCNA 、MMP-2单克隆抗体。利用免疫组织化学染色采用SP法进行染色。用PBS代替一抗孵育切片，作为阴性对照组。阳性对照由一抗试剂盒提供。
Ki-67与PCNA染色均以细胞核中出现棕黄色颗粒或均一棕色定义为免疫组
化阳性，MMP-2以细胞质中出现棕黄色颗粒或均一棕色定义为免疫组化阳性。
Ki-67分析，对于每张切片随机选择10个高倍视野1000个细胞计数其阳性细胞,用标记指数(LI)表示,即LI＝阳性细胞数/计数细胞数×100%,分别计算每例肿瘤的Ki-67LI。
PCNA与MMP-2分析，将切片置于OLYMPUS显微镜下，放大100倍，采用Image-Pro plus 4.1.00图像分析系统测定PCNA胞核内及MMP-2胞浆内免疫反应产物的光密度值（OD值）。同时测定非细胞区的OD值作为背景，免疫反应产物的OD值减去背景OD值得到校正OD值（COD值），即PCNA和MMP-2免疫反应产物的实际光密度，以减少由于染色造成的非特异性误差。每张切片的每个随机选取10个视野，取平均值。数据用均值±标准差（ ±SD）表示，所有OD值测量均在相同光学、光源条件下完成。
3 统计学分析
所有数据运用SPSS11.5软件包进行处理。统计学方法包括单因素方差分析（ANOVA），用LSD多重循环两两比较，方差不齐时用Dunnett’s T3法，成组设计样本t检验，二元变量相关分析。结果以均值±标准差（ ±SD）表示。P<0.05表示差异有统计学意义。
结 果
1 1H-MRS检查结果（见表1、图1-12）
中、低度恶性胶质瘤波谱中均未见Lip及Lac峰，19例高度恶性胶质瘤出现Lip峰，１例出现Lac峰。
统计学分析结果，Cho/NAA，中低度、高度恶性胶质瘤及高度恶性胶质瘤周水肿显著高于健侧。中、低度恶性胶质瘤与高度恶性胶质瘤之间亦存在显著性差异（P<0.01），高度恶性者明显高于中、低度恶性者。
NAA/Cr高度恶性胶质瘤与健侧存在显著性差异（P<0.05）。
Cho/Cr高度恶性胶质瘤与健侧存在显著性差异（P<0.05）。高度恶性胶质瘤与中、低度恶性胶质瘤存在显著性差异（P<0.05），高度恶性者明显高于中、低度恶性者。
2 免疫组织化学实验结果
2.1 Ki-67抗原表达检测结果 Ki-67染色阳性表现为细胞核内着棕褐色(见图13、14), Ki-67LI在中、低度恶性胶质瘤中为12.27±4.38，高度恶性胶质瘤中为26.14±3.83。两者之间存在显著性差异（P<0.05）。
2.2 PCNA、MMP-2抗原表达检测结果 PCNA染色阳性表现为细胞核内着棕褐色(见图15、16)，MMP-2染色阳性表现为细胞浆内着棕褐色(见图17、18)。PCNA胞核内及MMP-2胞浆内免疫反应产物的校正光密度值（COD值）见表2。两者在中、低度恶性和高度恶性胶质瘤中均存在显著性差异，高度恶性者明显高于中、低度恶性者（P<0.05）。
3 1H-MRS与免疫组织化学实验相关性分析结果
Cho/NAA、Cho/Cr与Ki-67LI、PCNA胞核内免疫反应产物的COD值、MMP-2胞浆内免疫反应产物的COD值均成强正相关（见表3，图19-24）。
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